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酶抑制

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FDA和EMA推荐的研究

细胞毒性和稳定性测定

CYP mRNA和酶诱导

抑制细胞色素P450(CYP)和UGT酶是临床相关药物间相互作用的主要原因。

通过确定供试品对基于混合人肝微粒体的培养中人CYP酶的选择性探针底物代谢的影响,评估供试品的抑制潜力。抑制酶动力学可得到进一步表征,得出的数据用于预测给药后是否可能发生具有临床意义的DDI。

酶抑制研究的监管注意事项

FDA和EMA药物间相互作用(DDI)准则均建议开展这些研究,以便在进行首次应用于人体试验之前就可逆(直接)和不可逆(时间依赖性)细胞色素P450抑制生成数据。抑制数据用于确定临床DDI研究的要求和范围。

方法

  • 测试系统:混合人肝微粒体(HLM)
  • 得到评估的CYP酶:CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4/5
  • 可应要求在直接抑制分析中评估的UGT酶: UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT11A6、UGT1A9、UGT2B7、UGT2B15
  • 供试品浓度:8种浓度,一式三份
  • 所有样本的制备和培养均使用Hamilton Microlab Star自动化液体处理系统进行
CYP抑制作用可通过直接测定和依赖性测定衡量。使用一种CYP选择性底物,其浓度要达到每种CYP酶最大反应速度(Km)的一半(请参见下文)。已知的抑制剂被用作直接和代谢依赖性抑制检测的阳性对照。所有培养均通过添加冷却乙腈终止,冷却乙腈中含有对CYP底物具有特异性的稳定标记内部代谢物标准。

时间依赖性(不可逆)抑制

在不存在和存在NADPH的情况下,检测方法使用8种浓度的供试品培养30分钟,然后再稀释到探针底物分析混合物中。如果观察到明显的时间依赖性抑制,则可以确定其他动力学参数,包括失活常数(kinact)和抑制常数(KI)。这些参数通过改变预培养时间和抑制剂浓度以实验方式确定,可帮助确定药物间相互作用的潜力。

直接抑制

在存在和不存在8种浓度的供试品的情况下进行检测以确定抑制潜力,并在可能的情况下确定IC50。

通过使用5种浓度的探针底物来确定抑制常数(Ki)和观察到的抑制类型可以进一步表征直接抑制。



 

 

细胞色素P450

底物

分析物

直接抑制

时间依赖性抑制

CYP1A2

非那西丁

乙酰氨基酚

氟伏沙明

呋拉茶碱

CYP2B6

安非他酮

羟基安非他酮

奥芬那君

ThioTEPA

CYP2C8

阿莫地喹

去乙基重氮喹

孟鲁司特

吉非贝齐1-O-β-葡糖醛酸

CYP2C9

双氯芬酸

4'-羟基双氯芬酸

磺胺苯并恶唑

钛酸

CYP2C19

甲苯妥英

4'-羟基苯乙妥英

努卡酮

埃索美拉唑

CYP2D6

右美沙芬

葡聚糖

奎尼丁

帕罗西汀

CYP3A4/5

睾酮

6β-羟基睾丸激素

酮康唑

红霉素

CYP3A4/5

咪达唑仑

1'-羟基咪达唑仑

酮康唑

曲霉素

交付成果

这些检测方法将提供CYP酶直接或不可逆抑制的IC50值。如果观察到明显的直接抑制,则可以确定抑制常数(Ki)。如果观察到明显的时间依赖性抑制,则可以确定基于机理的失活参数(KI和kinact)。借助这些参数,药理学可以在评估临床试验需求时提供额外指导。

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